pBM30 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 原核表達(dá)）

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產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號(hào)
pBM30 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 原核表達(dá)）	20 次	BJ-PJ6529

商品介紹：

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產(chǎn)品介紹：
利用痘苗病毒的拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點(diǎn)將PCR產(chǎn)物定向克隆到線性化的pBM30原核表達(dá)載體中。適用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物。引物T7和T7t可用于菌落PCR和測(cè)序鑒定。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
（1） 連接反應(yīng)僅需 5 分鐘
（2） 只適合平末端PCR 產(chǎn)物的快速、高效、定向克隆。
（3） 載體采用了新的制備工藝，零背景，無(wú)需藍(lán)白斑篩選。
（4） 具有T7 啟動(dòng)子，類似于 pET30 載體，具備原核表達(dá)所需的所有調(diào)控元件。適用于外源基因在大腸桿菌中的高水平表達(dá)。
（5） 帶 His.tag 和 S.tag 兩種純化標(biāo)簽。
（6） 具有凝血酶和腸激酶兩種蛋白酶酶切識(shí)別序列。
（7） 載體具有卡那霉素抗性。
注意事項(xiàng)：
（1） 引物要求：PCR 引物 5’端不能進(jìn)行磷酸化修飾，普通商業(yè)化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四個(gè)堿基。如果表達(dá)蛋白需 C 端帶 6His 標(biāo)簽，下游引物則需要去掉基因本身的終止密碼子（3 個(gè)堿基）。目的蛋白的翻譯終止由 6His 標(biāo)簽的終止密碼子TGA 來(lái)實(shí)現(xiàn)。
（2） DNA 聚合酶：選用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 擴(kuò)增。
（3） 連接時(shí)間：5-15 分鐘，一般為 15 分鐘。