熒光抗體技術(shù)三個(gè)方法特性

 免疫熒光技術(shù)原理：免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細(xì)胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見熒光所在的組織細(xì)胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量。

1. 直接法

直接法是熒光抗體技術(shù)蕞簡單、基本的方法。它通過標(biāo)記抗體直接與相應(yīng)抗原（待檢抗原標(biāo)本）結(jié)合，來鑒定未知抗原。

其優(yōu)點(diǎn)為：

①由于在反應(yīng)中只有兩種因子參與，結(jié)果判斷較簡單；

②特異性強(qiáng)，與其他抗原交叉染色較少；

③操作步驟少，方法簡便、省時(shí)。

其缺點(diǎn)有：

①敏感性較差；

②一種標(biāo)記抗體只能鑒定一種抗原；

③不能用于鑒定未知抗體。

2. 雙標(biāo)記法

雙標(biāo)記法是用兩種熒光素（常用FITC和PE）分別標(biāo)記特異性不同的抗體，用于檢測(cè)同一標(biāo)本中的不同抗原。此法常用于細(xì)胞表面抗原和受體的研究。

3. 間接法

間接法是目前最常用的方法。首先用已知未標(biāo)記的抗體（第1抗體）與待檢抗原反應(yīng)或用未知抗體與已知抗原反應(yīng)，反應(yīng)一定時(shí)間后，洗去未結(jié)合的抗體，再與標(biāo)記的抗免疫球蛋白抗體（二抗）反應(yīng)。在第1步反應(yīng)中，若抗原抗體發(fā)生了反應(yīng)，則抗體被固定在標(biāo)本上，那么第二步反應(yīng)中標(biāo)記的抗體（二抗）必然與第1步反應(yīng)形成的抗原抗體復(fù)合物中的抗體發(fā)生反應(yīng)，這樣就可以通過二抗的示蹤，對(duì)標(biāo)本中未知抗原或抗體進(jìn)行鑒定。

其優(yōu)點(diǎn)為：

①敏感性較高，是直接法的5-10倍；

②用一種標(biāo)記的抗體，就能與一種以上的相應(yīng)的抗體或抗原配合鑒定多種未知的抗原或抗體；

③既能鑒定未知抗原，又能鑒定未知抗體。

其缺點(diǎn)有：

①在反應(yīng)中有多種因子參與，容易產(chǎn)生非特異性染色，結(jié)果判斷有時(shí)較困難；

②操作步驟多，費(fèi)時(shí)。